測(cè)試前準(zhǔn)備
在進(jìn)行測(cè)定之前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀測(cè)試方案。結(jié)果可靠性取決于是否嚴(yán)格遵守所述的測(cè)試協(xié)議。以下測(cè)試程序僅對(duì)手動(dòng)程序進(jìn)行了驗(yàn)證。如果在ELISA自動(dòng)系統(tǒng)上進(jìn)行測(cè)試，我們建議將洗滌步驟從3次升到5次，洗滌液體積從300μl增加到350μl，以避免洗滌步驟影響結(jié)果。在開(kāi)始測(cè)定之前，應(yīng)在試劑盒中提供的結(jié)果表中仔細(xì)確定所有標(biāo)本和對(duì)照的分布和排版。選擇所需數(shù)量的微量滴定條或孔，并將其插入支架。
請(qǐng)至少安排以下板孔
1孔（如A1）：空白對(duì)照
1孔（如B1）：陰性質(zhì)控
1孔（如C1+D1）：臨界質(zhì)控
1孔（如E1）：陽(yáng)性質(zhì)控
如有必要，建議質(zhì)控品和樣本做復(fù)孔測(cè)試
按照給定的順序執(zhí)行所有測(cè)定步驟，并且在步驟之間沒(méi)有任何明顯的延遲。應(yīng)使用干凈的一次性吸頭來(lái)分配每個(gè)質(zhì)控和樣品。將培養(yǎng)箱調(diào)整至37°C±1°C。
1.將100μl質(zhì)控品和稀釋樣品加入到各孔中。保留A1為基底空白。
2.使用試劑盒中提供的蓋板膜蓋板。
3.在37±1℃下孵育1小時(shí)±5分鐘。
4.孵育完成后，移去鋁箔蓋板膜，棄去孔中的內(nèi)容物，用300μl洗滌液洗滌各孔三次。避免溶液溢出反應(yīng)孔。每個(gè)洗滌周期之間的浸泡時(shí)間應(yīng)為>5秒。最后，在下一步之前，在吸水紙上拍干板孔中液體。
注意：洗滌至關(guān)重要！洗滌不足導(dǎo)致精度差和吸光度值錯(cuò)誤升高。
5.將100μl酶結(jié)合物加入到除空白孔（例如A1）外的所有孔中。蓋板。
6.室溫（20?25℃）孵育30分鐘。避免暴露在陽(yáng)光下。
7.重復(fù)步驟4。
8.每孔加入100μlTMB底物溶液。
9.在黑暗中室溫（20?25℃）孵育15分鐘。
10.以與TMB底物溶液相同的順序和相同的速率將100μl終止液加入到所有孔中。
