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檢測鐵調(diào)素檢測試劑的正確步驟你學(xué)會了嗎?
  鐵調(diào)素是人體內(nèi)的一種鐵平衡調(diào)節(jié)多肽?;钚远嚯蔫F調(diào)素-25主要是在肝臟中產(chǎn)生,通過蛋白質(zhì)溶解切割前鐵調(diào)素的C-端的25個氨基酸所產(chǎn)生的。隨后,N-端的鐵調(diào)素-25轉(zhuǎn)化為更小的多肽(大約20~24個氨基酸),這些多肽活性更低并且在尿液中累積。
  鐵調(diào)素檢測試劑采用的是競爭酶聯(lián)免疫法微孔板上包被了能與生物活性鐵調(diào)素-25分子抗原位點特異性結(jié)合的單克隆抗體;樣本中的內(nèi)源性鐵調(diào)素與生物素化鐵調(diào)素競爭結(jié)合包被抗體,溫育后洗去未結(jié)合的部分;加入鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物溫育,洗滌;加入底物液,短時間的孵育,發(fā)生顏色變化反應(yīng);樣本中鐵調(diào)素濃度與顏色的強度成反比。
  檢測步驟
  鐵調(diào)素檢測試劑每次實驗都應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
  1、將實驗所需的板條固定于板架上
  2、每孔加100ul的分析緩沖液
  3、加20ul的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本于相應(yīng)的微孔內(nèi)
  4、每孔加入50ul的酶復(fù)合物,充分混勻10秒鐘
  5、室溫下,溫育60分鐘(300~700rpm)
  6、棄去孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔加300ul的洗滌液洗板4次(手動)或400ul洗板3次(洗板機)
  7、每孔加100ul的酶聯(lián)物
  8、室溫下30分鐘(無需振搖)
  9、重復(fù)步驟6
  10、每孔加100ul的底物液
  11、室溫下溫育20分鐘
  12、每孔加100ul的終止液
  13、鐵調(diào)素檢測試劑加入終止液10分鐘內(nèi),在酶標(biāo)儀450±10nm處檢測吸收值
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