人瘦素超敏酶免試驗(yàn)（日本IBL27775） 簡介 1950年發(fā)現(xiàn)隱性肥胖基因突變導(dǎo)致肥胖，且與二型糖尿病綜合征的病態(tài)肥胖類似。1994年在洛克菲勒大學(xué)團(tuán)隊發(fā)現(xiàn)肥胖基因編碼形成瘦素。瘦素是由肥胖基因產(chǎn)生的16KDa的分泌型蛋白。脂肪組織產(chǎn)生瘦素并釋放至血液中，隨著脂肪的累積，血液中瘦素的水平含量也呈增長趨勢。瘦素作為lipostat，隨著脂肪組織內(nèi)脂肪的沉積而增加；它還可作為一激素，指令大腦終止食物的消化和增加活動；還證明了可用于標(biāo)記和控制青春期的開始；另外，近期研究表明，瘦素可通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制骨形成。 實(shí)驗(yàn)原理 此試劑盒是一種夾心法的ELISA試劑盒，使用了兩種高特異性的抗體。TMB作為顯色劑，zui終溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品中瘦素的量成正比 檢測范圍 15.63~1000pg/mL 預(yù)期用途 此試劑盒用于人血清，EDTA-血漿和細(xì)胞上清中瘦素的定量檢測 重組的和天然的瘦素都可用此試劑盒檢測 試劑盒組成 微孔板，96T，包被有抗人瘦素兔子IgG抗體，親和純化 標(biāo)記抗體濃縮，30X，0.4ml，HRP標(biāo)記的抗人瘦素兔IgG Fab片段 標(biāo)準(zhǔn)品，0.5ml，2支，重組人瘦素 EIA緩沖液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS 標(biāo)記抗體稀釋液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐溫20的PBS 著色劑，TMB，15ml 終止液，1N硫酸，12ml 洗滌緩沖濃縮液，40X，50ml，0.005%吐溫20的磷酸緩沖液
準(zhǔn)備步驟 試驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供 酶標(biāo)儀（450nm） 帶刻度的量筒與燒杯 孵箱（37℃±1℃） 吸水紙 稀釋試管 微量移液器和取樣吸頭 去離子水 坐標(biāo)紙（log/log） 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的試管 洗滌瓶
特別注意 試驗(yàn)樣品采集后應(yīng)立即檢測或是凍存，凍存的樣品避免反復(fù)凍融，檢測前應(yīng)在低溫下先將其*溶解混勻 試驗(yàn)樣品用EIA緩沖液稀釋 試驗(yàn)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)做雙份檢測 試驗(yàn)樣品應(yīng)在中性PH范圍，有機(jī)溶劑的污染可能會影響檢測 只能用試劑盒提供的洗滌液洗板，否則會導(dǎo)致試驗(yàn)失敗 吸水紙上拍干微孔板，不能擦拭 TMB底物液應(yīng)貯存于黑暗處，因其對光敏感，且避免接觸金屬 加入終止液后30min內(nèi)必須酶標(biāo)儀讀數(shù)
結(jié)果計算 繪制曲線前，所有的數(shù)據(jù)都應(yīng)減去試驗(yàn)樣品空白值，包括標(biāo)準(zhǔn)品和未知的樣品。以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值和濃度在對數(shù)-對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可直接讀取未知樣品的濃度
附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果
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